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GUS染色實驗
GUS(β-葡萄糖苷酶)染色實驗是通過檢測β-葡萄糖苷酶活性來研究植物組織中目標(biāo)基因的表達情況,通常用于研究植物中特定基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。因為絕大多數(shù)植物細胞內(nèi)不存在內(nèi)源GUS活性,因此GUS基因被廣泛用作轉(zhuǎn)基因植物的報告基因。 GUS是一種β-葡萄糖苷酶,能與底物X-葡萄糖苷(X-Gluc)在GUS的作用下被水解,生成可觀察的藍色產(chǎn)物。并且可以與底物4-甲基傘型酮-β-葡萄糖醛酸苷(MUG)反應(yīng)產(chǎn)生熒光物質(zhì)4-甲基傘型酮(MU),其含量可由酶標(biāo)儀測出。因此,我們可以根據(jù)單位質(zhì)量的植物總蛋白在單位時間內(nèi)產(chǎn)生的熒光物質(zhì)的多少來定量檢測GUS的含量,進而檢測啟動子的表達強度。
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酵母單雜交(Y1H)
酵母單雜交系統(tǒng)(Yeast one-hybrid system)是一種研究蛋白質(zhì)和特定DNA序列相互作用的技術(shù)方法,酵母單雜交是根據(jù)DNA結(jié)合蛋白(即轉(zhuǎn)錄因子)與DNA順式作用元件結(jié)合調(diào)控報告基因表達的原理。
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雙熒光素酶報告實驗(Dual-LUC)
熒光素酶報告基因系統(tǒng)是以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(Firefly lucifer-ase)活性的一種報告系統(tǒng)。 為了減少實驗誤差,同時轉(zhuǎn)染一個能穩(wěn)定表達的海腎熒光素酶(Renilla luciferase)的質(zhì)粒作為內(nèi)參,催化腔腸素氧化產(chǎn)生藍光,所以叫雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)。現(xiàn)已成為研究轉(zhuǎn)錄因子參與基因調(diào)控,以及miRNA和其靶基因互作驗證的有效手段。
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染色質(zhì)可及性測序(ATAC-seq)
ATAC-seq(Assay for Transposase Accessible Chro-matin with high-throughput sequencing)是一種在全基因組范圍內(nèi)檢測染色質(zhì)的開放程度的組學(xué)技術(shù),可以得到全基因組范圍內(nèi)的蛋白質(zhì)可能結(jié)合的位點信息。 其原理是利用轉(zhuǎn)座酶Tn5容易結(jié)合在開放染色質(zhì)的特性,對Tn5酶捕獲到的DNA序列進行測序。該技術(shù)可用于分析開放的染色質(zhì)區(qū)域上可能結(jié)合的潛在調(diào)控蛋白(如:轉(zhuǎn)錄因子和輔因子),用此方法與其他方法結(jié)合篩查感興趣的特定調(diào)控因子。
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DNA Pull Down
DNA Pull Down是一種新穎的DNA-蛋白互作技術(shù),能夠鑒定與特定DNA序列結(jié)合的蛋白(轉(zhuǎn)錄因子或者DNA結(jié)合蛋白)。
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