GST/Halo-Pull down
檢測(cè)已經(jīng)蛋白質(zhì)之間的相互作用，鑒定與已知蛋白相互作用的未知蛋白
真核表達(dá)系統(tǒng)，蛋白更接近體內(nèi)結(jié)構(gòu)
沒有細(xì)胞內(nèi)干擾因素的限制，表達(dá)成功率高
蛋白表達(dá)載體構(gòu)建成功后，不需要轉(zhuǎn)化和鑒定，可直接表達(dá)目的蛋白，節(jié)省時(shí)間
- 技術(shù)簡(jiǎn)介
- 技術(shù)流程
- 結(jié)果示例
- 應(yīng)用案例
蛋白Pull down技術(shù)將目標(biāo)蛋白進(jìn)行體外原核表達(dá)，使標(biāo)簽蛋白（Halo、GST、His等）與目標(biāo)蛋白融合表達(dá)，可以不受抗體、物種限制僅借助標(biāo)簽的親和介質(zhì)將目標(biāo)蛋白純化出來，目標(biāo)蛋白在純化過程中可以將與其能夠發(fā)生作用的蛋白“下拉”下來，進(jìn)而利用蛋膠、Western Blot或者質(zhì)譜鑒定拉下來的蛋白質(zhì)，這些蛋白即與目標(biāo)蛋白相互作用的蛋白。蛋白Pull down實(shí)驗(yàn)還可以通過外源同時(shí)表達(dá)目標(biāo)蛋白和待測(cè)蛋白，利用Pull down點(diǎn)對(duì)點(diǎn)的確定它們是否發(fā)生直接的相互作用，也可以僅表達(dá)蛋白質(zhì)的結(jié)合區(qū)域進(jìn)行蛋白Pull down，確定兩個(gè)蛋白結(jié)合的結(jié)構(gòu)域。
本公司主要提供Halo/GST-tag pull down：Halo-tag pull down是使用體外真核表達(dá)系統(tǒng)來表達(dá)目的蛋白，表達(dá)的目的蛋白攜帶Halo標(biāo)簽；GST-tag pull down是使用大腸桿菌誘導(dǎo)表達(dá)目的蛋白，表達(dá)的目的蛋白攜帶GST標(biāo)簽，也可以利用其它標(biāo)簽蛋白進(jìn)行pull down實(shí)驗(yàn)。
Halo/FLAG-tag pull down技術(shù)優(yōu)勢(shì)：
真核表達(dá)系統(tǒng)，蛋白更接近體內(nèi)結(jié)構(gòu)
沒有細(xì)胞內(nèi)干擾因素的限制，表達(dá)成功率高
蛋白表達(dá)載體構(gòu)建成功后，不需要轉(zhuǎn)化和鑒定，可直接表達(dá)目的蛋白，節(jié)省時(shí)間
| 步驟 | 內(nèi)容 | 交付內(nèi)容 | 周期 |
| 載體構(gòu)建 |
| 測(cè)序結(jié)果 | 1-2周 |
| 無細(xì)胞表達(dá)+純化 |
| 表達(dá)評(píng)估報(bào)告 | 1周 |
| Pull Down |
| 銀染結(jié)果 | 1周 |
| 質(zhì)譜檢測(cè) |
| 質(zhì)譜結(jié)果 | 2周 |
案例1
2023年12月，北京林業(yè)大學(xué)和藍(lán)景科信合作，在植物學(xué)主流學(xué)術(shù)期刊Plant Stress（IF=5.0）上，發(fā)表了題為“Populus euphratica CPK21 interacts with heavy metal stress-associated proteins to mediate Cd tolerance in Arabidopsis”的研究成果。該研究借助HaloTag pull-down技術(shù)鑒定了胡楊CPK21的互作蛋白，為揭示胡楊CPK21調(diào)控植物Cd耐受的分子機(jī)制研究提供了技術(shù)支撐。
原文鏈接：https://doi.org/10.1016/j.stress.2023.100328
案例2
2025年8月，北京林業(yè)大學(xué)林木花卉遺傳育種教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室的研究團(tuán)隊(duì)在《Environmental and Experimental Botany》發(fā)表一篇題為“PeCPK21 interacts with HMAPs to tolerate elevated cadmium stress in Populus × canescens”的研究論文。該研究借助HaloTag pull-down和質(zhì)譜分析，揭示了PeCPK21作為Cd2?信號(hào)傳感器，通過與HMAPs互作從多維度增強(qiáng)楊樹耐鎘性的分子機(jī)制，為林木耐鎘基因工程提供了重要靶點(diǎn)。
原文鏈接：https://doi.org/10.1016/j.envexpbot.2025.106216
